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哺乳類實驗動物病理剖檢方法

日期:2009-08-17 15:39:47


一、基本要求

(一)實驗動物背景資料記錄

1實驗動物來源、種類、年齡、性別、原編號、體重、臨床癥狀等。
2
剖檢時間、地點,麻醉方法、時間、麻醉者,處死方法、解剖者、記錄人、溫度、濕度。
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其他指標:動物剖殺前禁食(不禁水)時間一致,為12h

(二)體表檢查

一般用于組織學取材的實驗動物剖殺前應先隔離檢疫710d,用于實驗組和對照組動物的病理剖檢視不同動物實驗的要求而定。剖檢前的體表檢查項目如下:

1、發育狀態

體格發育是否與年齡、品種相稱,各部發育比例是否正常,有無畸形。

2、營養狀態

豐滿還是消瘦,檢查時可用手撫摸實驗動物背、腰部,營養良好時,背腰部厚實,皮膚彈性好。營養不良時,背腰部椎骨突出,肋骨明顯。

3、精神狀態

實驗動物的自主活動、運動情況,對外界的反應(遲鈍或亢進)、步態如何。

4、感覺器官

眼睛的瞳孔是否清晰等,有無分泌物,眼瞼有無發炎及紅腫,球結膜顏色變化,有否潮紅、蒼白、黃染或發紺。

5、呼吸系統

呼吸動物如呼吸次數、節律、有無呼吸困難;上呼吸道檢查如鼻腔分泌物多少、有無噴嚏和咳嗽;必要時可通過聽診檢查肺部。

6、消化系統

采食與飲水觀察,包括食欲廢絕、減退、亢進和異嗜,口腔黏膜顏色和氣味。有無嘔吐、腹瀉、便秘,肛周有無污物,糞便數量、硬度、顏色、氣味等。

7、被毛和皮膚

檢查皮膚顏色、溫度、彈性、有無創傷、膿瘍、疥癬、濕疹,毛發色澤、疏密、有無脫落。

(三)病理取材基本要求

1  病理檢查應分層次進行,先進行一般外觀觀察,然后剖檢觀察,再進行光鏡詳細檢查。
2
 
通常選擇正常與病變交界處組織,即包括病變本身及病變周圍組織。
3
 
對照組動物相同器官取材時,選材部位應盡量一致。
4
 
肉眼看不到的明顯病變時,各試驗組選取標本位置應一致。
5
 
所選組織應包括臟器全部層次結構或重要結構,如腎應包括皮質、髓質和腎盂。
6
 
體積大和分葉的器官,應視不同組織選取多個部位,小器官可整體取材并固定,如淋巴結、扁桃體、甲狀腺等。
7
 
胃腸標本應將內容物沖洗掉,以免內容物影響組織固定,產生自溶。
8
 
所取材料應盡量保持肉眼標本的完整性,不宜過厚或過薄,一般厚約35mm,大小為1.52cm2
9
 
切取組織時不要擠壓,使用鋒利刀具,少用剪刀,勿選用被器械鉗壓過的部位。
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標本取材要熟悉,盡可能快的完成整個過程,特別是易自溶的組織,如腸道、腦、腺體等。
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剖檢記錄應客觀、詳細,用形象描述而不能用診斷的病名來代替。
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同一實驗中的對照組和實驗組動物應交叉剖檢,嚴格統一各種條件和操作,盡量避免各種可能的干擾因素。

二、病理剖檢基本操作

(一)常用器械及使用方法

1、解剖刀

主要用于切開和分割軟組織,刀片宜用血管鉗(可持針鉗)夾持安裝,避免割傷手指。

常用的持刀法有以下4種:執弓式、抓持式、執筆式、反挑式。

2、手術剪

用于分離與剪開

3、血管鉗

用于分離和鉗夾組織,鉗夾縫合針和布巾等。

4、手術鑷

用于夾持組織,以利于解剖和縫合。

5、拉鉤

用于牽引和暴露

(二)基本操作

1、切開

在同一平面上時,先繃緊組織,將刀刃與平面垂直,用力要得當,一次垂直切開,切口整齊而不偏斜,禁止斜切和鋸切,以減少損傷。切開多層組織時,一般應按組織層次分層切開,避免損傷深層組織器官。

2、組織分離法

可用銳性分離法,使用刀、剪等銳性器械直接切割,如皮膚、黏膜、精細結構和緊密連結組織的分離;也可用鈍性分離法,使用分柄、止血鉗、剝離器,手指等分離,如肌肉,疏松結締組織等的分離。

3、結扎

用絲線打結的方法扎組織和血管,參與縫合器官和皮膚。

4、止血

大量出血導致胸、腹部積血使剖檢視野模糊不清,可能會影響和干擾病變的辨別和取材,因此動物剖檢有時要求止血。

1)紗布塊壓迫止血法。剖檢過程中,為觀察病變性質和部位,辨清組織和神經、血管通路,以及對較廣泛的毛細血管滲出,可用紗布按壓施行短暫性的止血,但不可用紗布來回擦拭血液,以免損傷組織。

2 鉗夾止血法。先用紗布塊止血,看清出血點或血管后用止血鉗的尖端垂直對準出血點,迅速而準確的鉗夾并捻轉,使血管閉塞而止血。

3 結扎止血法。用于動脈出血或較大的血管出血。

三、剖檢取材程序

(一)實驗動物尸體的固定,通常為仰臥位固定。

(二)剖檢順序多為先腹腔后胸腔,再腦、脊髓、骨髓、皮膚肌肉等。取材順序基本與此相同。

(三) 檢查內容

1、位置

有無移位、異位

2、大小

體積增大、縮小或腫大

3、色澤

整體或局部顏色的增減改變。

4、附加物

有無出血、積液、粘連。

5、質地

硬、韌、軟等。

6、切面

多汁、泡沫狀、帶血、膿汁、干燥等。

7 、中空器官的黏膜面

有無出血、潰瘍、增厚、隆起物等。

(四)剖檢和取材程度

1、腹腔和腹腔器官

沿腹部正中線切開劍突至肛門之間的腹前壁,再沿最低位肋骨分別向左右兩側切開側腹壁至脊柱兩旁,完全暴露腹腔器官。觀察有無積液、血液和炎性滲出物,如有則用吸管吸出,測量容積并經離心沉淀涂片檢查,必要時作細菌培養。檢查粘膜是否光滑,有無充血、瘀血、出血、破裂、膿腫、粘連、腫瘤、寄生蟲等,膈的緊張度及有無破裂。

1)脾臟。檢查大小、厚薄、硬度、性狀、色澤、有否肥厚、破裂等。然后沿長軸將脾切成兩半,切面要平整,檢查脾小梁、紅髓、濾泡的色澤,切面的出血量。

2)胰腺。檢查胰腺色澤和硬度,切面檢查有無出血。

3)胃腸。檢查胃的大小、胃腸道漿膜面的色澤,有無粘連、腫瘤、寄生蟲結節。然后沿胃大彎、腸系膜附著部依次剪開胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸。觀察胃內有無異物,內容物的氣味及性狀,除去內容物,檢查黏膜顏色,有無充血、出血、化膿。采用邊剪開邊觀察的辦法檢查腸管,觀察腸內容物數量、性狀,有無氣體、血液、異物、寄生蟲,腸黏膜皺壁有無增厚、水腫、充血、粘液量、潰瘍、壞死、淋巴組織性狀及有無炎癥。

4 腎臟。首先檢查腎臟大小、硬度、被膜是否容易剝離,腎表面的色澤、平滑度,有無疤痕、出血變化。然后檢查切面皮質和髓質的色澤,有無瘀血、出血、化膿和梗死。注意觀察皮質和髓質交界處的切面是否隆突,以及腎盂、輸尿管、腎淋巴結的性狀,有無腫瘤及寄生蟲等。

5 肝臟。首先檢查肝臟的大小、被膜的性狀、邊緣的厚薄、實質的硬度和色澤,以及肝淋巴結、血管、肝管等的性狀。然后作切面,檢查切面的出血量、色澤,肝小葉性狀、有無膿腫、肝壞死等變化。

6 腎上腺。觀察外形、大小、色澤和硬度,作縱切和橫切,檢查皮質和髓質的色澤及有無出血。

2、盆腔器官

1)膀胱。檢查膀胱的大小、尿量及色澤,黏膜有無出血、炎癥和結石等。

2 雄性生殖器官。檢查睪丸、附睪、凝固腺、前列腺有無粘連、出血、水腫、積液等。

3 雌性生殖器官。沿子宮體背側剪開子宮角,檢查子宮內膜的色澤、有無充血、出血、炎癥等,觀察卵巢和輸卵管有無粘連、出血、水腫、積液等。

3、胸腔、口腔及其器官

用鑷子夾住胸骨劍突,剪斷膈肌與胸骨的連結,提起胸骨,在胸椎兩側分別剪斷左、右側胸壁的肋骨,取下整個胸壁,打開胸腔,依次取出胸腺和心臟。將下頜骨的兩下頜支內側與舌連結的肌肉切斷,將咽、喉、氣管、食道與周圍組織分離,用鑷子夾住氣管向上提起,剪斷肺與胸膜的連結韌帶,然后將咽、喉、氣管、食道連同整個肺臟一并取出。如有積液應觀察其數量和性狀,盡量吸取,測量容積并涂片,檢查胸膜色澤,有無出血、充血或粘連。

1 心臟。剪開心包膜,暴露心臟,注意心包的光澤度及心包內液體的情況,心臟的大小、外形、心外膜情況。自下腔靜脈入口處至右心房作直線剖開,從此直線中點沿心臟右緣剖至心尖部,從距離心尖部與心室間隔右側1cm處平行地剖至肺動脈;檢查右心房、右心室、三尖瓣、肺動脈瓣、腱索有否病變。自左右靜脈入口處將左心房直線切開,沿心臟左緣剖至心尖部,再從距離心尖部與心室間隔左側1cm處平行地剖開左心室的前壁和主動脈,檢查二尖瓣、主動脈瓣、腱索有無病變,左心房、左心室內壁有無出血和感染。自冠狀動脈口起剪開前降支和旋支,在主動脈根部右側,于右心室的心外膜找到右冠狀動脈主干,先橫切一刀,再剪至后降支;觀察有無粥樣硬化和血栓等。

2  口腔。檢查牙齒的變化,口腔黏膜的色澤、有無外傷、潰瘍和白斑,舌黏膜有無出血、外傷及舌苔的情況。

3  咽喉。觀察喉頭、會厭軟骨黏膜的色澤、淋巴結的性狀及喉囊有無積膿。

4  鼻腔。檢查鼻腔和鼻中隔黏膜的色澤、有無出血、炎性水腫、結節、糜爛、潰瘍穿孔及疤痕等。

5  下頜及頸部淋巴結。檢查下頜及頸部淋巴結的大小、硬度、有無出血和化膿等。

6  氣管。檢查氣管有無出血、黏液量等。

7  肺臟。檢查肺的色澤、有無出血、炎癥、肺氣腫、肺萎縮、腫瘤等。

8  其他器官。胸腺,甲狀腺,扁桃體等的色澤、有無粘連、出血、水腫等。

4、顱腔及腦

以猴為例,剝離顱頂部軟組織,沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm處的連線,用弓形鋸環繞該線鋸開顱骨外板及板障,然后用丁字鑿輕輕鑿開內板,揭開顱蓋,此時可見覆蓋于腦表面的硬腦膜,切開硬腦膜暴露腦組織,在距顱骨鋸口斷端上0.5cm處,從前向后環行剪開硬腦膜,枕部的硬腦膜應保留1.5cm長,防止取腦過程向后推壓腦組織時,枕骨斷端損壞枕葉腦組織。向后方輕輕揭起硬腦膜及大腦鐮,暴露腦組織,用手指從額骨前上方伸入顱前窩,輕輕推壓大腦額葉,直至見到篩板上的嗅球為止,切斷嗅絲與嗅球的聯系,將嗅球與腦一齊拉起,見到視神經和視交叉時立刻停止,在腦底附近依次切斷頸內動脈、視神經,再將腦向后拉,可見到垂體及漏斗,繼續將腦向后拉起,切斷連于腦的腦神經。從腦干腹側面把手術刀伸入枕骨大孔,切斷脊髓,即可將腦取出,用流水沖洗干凈備用。新鮮腦很軟,易變形和受挫傷,操作過程中必須用手扶托,取出腦后應立刻用紗布包裹,浸泡固定液中保存,以免變形。

檢查軟腦膜、硬腦膜血管充盈情況,腦回之間的腦溝中液體的數量與色澤,腦表面凸起或凹下的地方是否明顯,可用手觸膜判定其硬度。用刀將腦做一水平切面,保留胼胝體,暴露側腦室,注意檢查尾狀核有無出血、軟化灶。側腦室內容物數量、性質,然后將腦做多處切面,檢查有無變化。

四、臟器測量和稱重

1 解剖后應迅速將臟器稱重,以免水分蒸發造成差異,特別是腎上腺等小器官的稱重。

2 臟器稱重前應盡量將周圍脂肪組織和結締組織剔除,并用濾紙吸去臟器表面血液及體液,特別是腎上腺、甲狀腺、前列腺等較小的器官,更要新鮮稱重,防止器官干燥失水而重量減輕。

3 空腔器官稱重前,應清除其腔內液體,如心臟應除去血塊。