標簽內(nèi)參抗體能否用于免疫沉淀（IP）實驗，需注意哪些條件？
日期：2025-12-03 10:15:18
標簽內(nèi)參抗體可以用于免疫沉淀（IP）實驗，但需滿足特定的抗體特性和實驗條件，同時要規(guī)避一些關鍵風險，具體如下：
1、能否用于IP實驗的核心前提
標簽內(nèi)參抗體能否用于IP，首要取決于抗體的抗原結(jié)合表位及交聯(lián)方式：
若抗體識別的標簽表位（如His、Myc、Flag、HA等）在靶蛋白上呈暴露狀態(tài)，且抗體的可變區(qū)能在非變性/變性條件下穩(wěn)定結(jié)合表位，即可用于IP；
需優(yōu)先選擇經(jīng)IP驗證的商品化標簽內(nèi)參抗體，這類抗體的說明書會明確標注“適用于IP”，其Fc段或其他區(qū)域已做優(yōu)化，避免非特異性結(jié)合或影響抗原-抗體復合物的沉淀。
2、實驗中需注意的關鍵條件
（1）抗體的選擇與預處理
避免使用僅適用于WB的標簽抗體，這類抗體多為識別變性表位的多抗/單抗，在天然構象下結(jié)合能力弱，無法有效沉淀靶蛋白；
若使用自制抗體，需提前通過ProteinA/G/L親和柱純化IgG組分，去除血清雜蛋白，減少非特異性沉淀。
（2）裂解液與緩沖體系
需使用溫和的非變性裂解液（如含1%NP-40、0.5%TritonX-100的裂解液），避免強變性劑（如SDS）和高鹽濃度，防止靶蛋白構象破壞或標簽表位遮蔽，同時保護抗體-抗原復合物的穩(wěn)定性；
裂解液中需添加蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑（若靶蛋白為磷酸化蛋白），防止靶蛋白降解或修飾位點丟失。
（3）沉淀載體的適配性
需選擇與抗體Fc段匹配的沉淀載體，如鼠源單抗用ProteinGbeads，兔源多抗用ProteinAbeads，也可使用偶聯(lián)抗標簽抗體的親和beads（如Anti-FlagM2beads），提升沉淀效率；
實驗前需用裂解液充分洗滌beads，去除載體自身的雜蛋白，降低背景污染。
（4）特異性與對照設置
必須設置陰性對照：包括無抗體的beads對照、正常IgG對照、無靶蛋白的細胞裂解液對照，用于排除非特異性結(jié)合；
若靶蛋白為融合蛋白，需設置僅含標簽的空載載體轉(zhuǎn)染細胞的裂解液對照，驗證抗體對標簽的特異性。
（5）洗脫與后續(xù)檢測
洗脫時可選擇溫和洗脫方式（如酸性洗脫液pH2.5~3.0、標簽肽競爭洗脫），避免強洗脫條件導致抗體和靶蛋白變性，影響后續(xù)WB驗證；
洗脫后需及時中和酸性洗脫液，或通過透析去除標簽肽，保證靶蛋白的活性和檢測準確性。
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