單克隆抗體的制備采用了什么技術?
日期：2026-01-15 10:42:17
制備單克隆抗體的核心技術是雜交瘤技術，這一技術由Köhler和Milstein在1975年發明，其核心原理是將能產生特定抗體的B淋巴細胞與能無限增殖的骨髓瘤細胞進行融合，得到兼具兩種細胞特性的雜交瘤細胞。具體的技術流程和涉及的關鍵技術環節如下：
4、抗體檢測與克隆化
1、免疫動物
向實驗動物（常用小鼠）體內注射特定抗原，刺激其免疫系統產生能分泌針對該抗原抗體的B淋巴細胞。
2、細胞融合
采用聚乙二醇（PEG）介導融合法，或電融合技術，將免疫小鼠脾臟中的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞進行融合。
3、選擇性篩選
3、選擇性篩選
將融合后的細胞置于HAT培養基中培養。骨髓瘤細胞因缺乏特定酶無法在HAT培養基存活；未融合的B淋巴細胞在體外培養條件下壽命有限，會自行凋亡；只有融合成功的雜交瘤細胞可以存活并增殖。
4、抗體檢測與克隆化
采用ELISA等方法篩選出能分泌目標抗體的雜交瘤細胞，再通過有限稀釋法或軟瓊脂克隆法進行單細胞克隆，得到可以穩定分泌單克隆抗體的細胞株。
5、抗體的大量制備
5、抗體的大量制備
可通過體外細胞培養或體內誘生腹水兩種方式大量獲取單克隆抗體。
隨著生物技術的發展，也出現了一些新型的單克隆抗體制備技術，例如噬菌體展示技術、轉基因小鼠技術等，這些技術可以繞開雜交瘤技術的部分限制，制備人源化或全人源的單克隆抗體。
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