克隆化培養過程中，部分雜交瘤細胞可能出現抗體分泌能力下降或丟失，如何通過定期檢測抗體效價來穩定細胞株特性？
日期：2025-10-15 13:15:37
通過定期檢測抗體效價穩定雜交瘤細胞株特性，核心是建立“檢測-篩選-純化”的閉環管理流程，在抗體分泌能力下降前及時篩選出高分泌亞克隆，避免優勢細胞株被低分泌株取代。
一、制定科學的抗體效價定期檢測計劃
檢測頻率需結合細胞培養階段調整，重點覆蓋“增殖關鍵期”和“傳代穩定期”，確保及時發現效價變化。
初期克隆篩選階段（克隆化后1-4周）：檢測頻率最高，每3-5天檢測1次。此階段細胞克隆剛形成，不同亞克隆的抗體分泌能力差異大，需通過高頻檢測鎖定高分泌克?。ㄈ缧r≥1:10000的克?。?/span>
擴大培養階段（4-8周）：每7天檢測1次。細胞從單克隆擴大至大規模培養時，易因營養競爭出現低分泌株增殖優勢，需通過檢測確認效價是否穩定（波動幅度建議≤20%）。
長期傳代/凍存復蘇后（8周以上）：每2周檢測1次。長期傳代可能導致細胞基因組不穩定，凍存復蘇可能損傷部分高分泌細胞，需通過檢測判斷細胞株是否仍符合生產/實驗需求，若效價下降超30%，需啟動復蘇備份或亞克隆篩選。
二、選擇適配的抗體效價檢測方法
不同檢測方法的靈敏度、特異性和操作效率不同，需根據細胞培養規模和實驗需求選擇，確保檢測結果能真實反映抗體分泌能力。
ELISA（酶聯免疫吸附試驗）：首選方法，適用于絕大多數雜交瘤細胞。優勢是靈敏度高（可檢測ng/mL級抗體）、特異性強（能區分目標抗體與雜蛋白），且可通過梯度稀釋定量效價，缺點是操作稍繁瑣，需提前準備包被抗原和二抗。
FCM（流式細胞術）：適用于分泌細胞表面抗體（如單抗）的雜交瘤細胞。優勢是可直接檢測活細胞的抗體分泌量，無需收集上清，且能同時分析細胞活力，缺點是需特定熒光標記二抗，成本較高。
WesternBlot（蛋白質印跡法）：適用于需驗證抗體特異性的場景。優勢是可同時檢測抗體效價和特異性，避免篩選出“高分泌但非目標抗體”的細胞株，缺點是操作耗時，不適用于高頻批量檢測。
三、基于檢測結果的細胞株穩定措施
檢測發現效價下降后，需通過“篩選-純化-備份”三步法恢復或穩定細胞株特性，避免直接丟棄導致實驗/生產中斷。
立即進行亞克隆篩選：取效價下降的細胞株，通過有限稀釋法或單細胞分選儀（如流式分選）獲得單克隆細胞，重新進行克隆化培養。對每個新克隆，從第3天開始檢測效價，篩選出效價恢復至初始水平80%以上的克隆，作為新的主細胞株。
優化培養條件減少效價流失：分析效價下降可能的環境因素，針對性調整培養條件。例如：若細胞密度過高導致營養不足，可降低傳代密度（如從1×10^5cells/mL調整為5×10^4cells/mL）；若血清批次影響抗體分泌，可更換為胎牛血清（FBS）批次，并提前進行血清兼容性測試。
建立多級細胞庫備份：在細胞株效價穩定期（如連續3次檢測效價波動≤15%），建立“主細胞庫（MCB）-工作細胞庫（WCB）”兩級備份。主細胞庫凍存10-20支，用于長期保存；工作細胞庫從主細胞庫復蘇后擴大培養，凍存50-100支，用于日常實驗/生產。每次復蘇工作細胞庫前，需檢測效價，確保與主細胞庫一致。
