大腸桿菌表達系統(tǒng)中，IPTG誘導蛋白表達的濃度和誘導時間通常如何確定？?
日期：2025-11-03 15:42:02
IPTG誘導濃度和時間需通過預實驗優(yōu)化確定，常規(guī)參考范圍為濃度0.1–1.0mM、時間2–16h，最終以“目的蛋白產(chǎn)量高、雜蛋白少”為目標。
1.誘導濃度的確定方法
常規(guī)參考范圍：0.1–1.0mM，最常用0.5mM作為初始嘗試濃度。
優(yōu)化方式：設置梯度濃度（如0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mM），相同誘導時間下，通過SDS-PAGE或WesternBlot檢測目的蛋白表達量，選取最優(yōu)濃度。
特殊情況：高濃度IPTG可能抑制細菌生長或導致蛋白包涵體形成，需降低濃度（如0.05–0.2mM）；低表達蛋白可適當提高濃度，但不建議超過2.0mM。
2.誘導時間的確定方法
常規(guī)參考范圍：37℃誘導時2–6h，低溫誘導（16–25℃）時8–16h。
優(yōu)化方式：固定最優(yōu)IPTG濃度，在不同時間點（如2、4、6、8、12h）取樣檢測，繪制表達量隨時間變化曲線，選取表達量峰值對應的時間。
關鍵原則：避免誘導時間過短（蛋白未充分表達）或過長（雜蛋白增多、目的蛋白降解）。
3.影響優(yōu)化的關鍵因素
目的蛋白特性：可溶性蛋白可適當縮短誘導時間，難表達或易降解蛋白需延長低溫誘導時間。
宿主菌和載體：不同菌株（如BL21、Rosetta）和啟動子（如T7、lac）對IPTG的敏感性不同，需針對性調整。
