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AKTA蛋白純化步驟

日期:2023-07-28 13:35:20


    AKTA是常用的蛋白質純化系統,廣泛應用于生物分子的純化和制備。下面是一般使用AKTA系統進行蛋白純化的步驟:
 
準備工作
 
    將需要純化的蛋白樣品預處理,如細胞破碎、超速離心等,以獲得目標蛋白的提取物。
    準備好所需的純化介質和緩沖溶液:根據目標蛋白的性質選擇合適的親和層析介質、離子交換層析介質或其他純化介質,并配置相應的緩沖溶液。
 
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設定AKTA系統參數
 
    將純化介質裝填到柱子中,并將柱子安裝到AKTA系統上。
    設置流速、梯度程序和檢測波長等操作參數,根據具體純化方法和目標蛋白的特性進行設定。
 
樣品加載
 
    將預處理好的蛋白樣品注入到AKTA系統中的注射器或自動注射器中。
在設定的流速下,將樣品通過柱子,使樣品中的目標蛋白與純化介質發生特異性結合。
 
柱洗脫
 
    根據純化介質的特性和純化策略,使用合適的洗脫緩沖溶液沖洗柱子,去除非特異性結合的雜質。
    注入高濃度洗脫緩沖溶液,使目標蛋白與純化介質解離。
 
方案收集
 
    設置合適的方案收集方式,可以按分數收集純化的樣品。
    監控波長進行實時檢測并根據信號強度進行分數收集。

評估純化后的樣品
 
    通過SDS-PAGE、Western blot等方法對純化后的樣品進行分析,評估純化效果和目標蛋白的純度。
    具體的步驟可能會因純化介質、目標蛋白的性質和純化策略的不同而有所變化。因此,在進行蛋白純化時,建議參考相關的文獻和廠家提供的操作手冊,并根據實際情況進行優化調整。