elisa檢測(cè)時(shí)底物溶液的使用注意事項(xiàng)有哪些？
日期：2025-04-15 10:05:00
底物溶液應(yīng)在使用前新鮮配制，避免長(zhǎng)時(shí)間放置。配制底物溶液時(shí)要嚴(yán)格按照說(shuō)明書的要求進(jìn)行，注意試劑的加入順序和比例。底物溶液對(duì)光敏感，應(yīng)在避光條件下保存和使用。加入底物溶液后，要注意觀察顯色反應(yīng)的進(jìn)程，避免顯色過(guò)度或不足。當(dāng)達(dá)到合適的顯色程度時(shí)，應(yīng)及時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。
保存條件：底物溶液通常需要在避光、低溫（一般為 2 - 8℃）的條件下保存。有些底物對(duì)光和溫度較為敏感，不適當(dāng)?shù)谋４鏃l件可能導(dǎo)致底物提前分解或變質(zhì)，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
現(xiàn)用現(xiàn)配：為了保證底物溶液的有效性和穩(wěn)定性，最好是現(xiàn)用現(xiàn)配。尤其是對(duì)于一些含有不穩(wěn)定成分的底物，如含有過(guò)氧化氫的底物溶液，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)使過(guò)氧化氫分解，降低底物的活性。
平衡至室溫：在使用前，應(yīng)將底物溶液從冰箱中取出，放置在室溫下平衡一段時(shí)間，一般為 15 - 30 分鐘。這樣可以避免因底物溶液與反應(yīng)體系的溫度差異而影響反應(yīng)速率和檢測(cè)結(jié)果。
避免污染：使用干凈的移液器和容器來(lái)吸取和分裝底物溶液，避免底物溶液受到污染。同時(shí)，不要將用過(guò)的移液器頭再次插入底物溶液中，防止交叉污染。
加入順序和時(shí)間：在 ELISA 檢測(cè)中，底物溶液通常是在加入酶標(biāo)抗體并孵育洗滌后加入。要注意按照實(shí)驗(yàn)步驟的要求準(zhǔn)確加入底物溶液，并嚴(yán)格控制加入后的反應(yīng)時(shí)間。不同的底物反應(yīng)時(shí)間可能有所不同，一般在 5 - 30 分鐘之間，具體時(shí)間需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案和底物的特性來(lái)確定。
反應(yīng)終止：當(dāng)?shù)孜锓磻?yīng)達(dá)到預(yù)期的時(shí)間后，需要及時(shí)加入終止液來(lái)終止反應(yīng)。終止液的加入量和加入方式也需要準(zhǔn)確操作，以確保反應(yīng)能夠完全終止，避免因反應(yīng)過(guò)度或終止不完全而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
觀察和記錄：在底物反應(yīng)過(guò)程中，要注意觀察反應(yīng)孔內(nèi)的顏色變化?？梢允褂妹笜?biāo)儀在特定波長(zhǎng)下讀取吸光度值，以定量分析檢測(cè)結(jié)果。同時(shí)，也要注意觀察顏色變化是否均勻、有無(wú)異常顏色出現(xiàn)等情況，如有異常，應(yīng)及時(shí)分析原因并采取相應(yīng)的措施。
安全防護(hù)：一些底物溶液可能具有一定的毒性或腐蝕性，如含有鄰苯二胺（OPD）的底物溶液具有致癌性，含有四甲基聯(lián)苯胺（TMB）的底物溶液可能對(duì)皮膚和眼睛有刺激性。在使用過(guò)程中，應(yīng)注意佩戴手套、護(hù)目鏡等防護(hù)用品，避免接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸到，應(yīng)立即用大量清水沖洗，并及時(shí)就醫(yī)。
