血清樣本與血漿樣本在ELISA試劑盒檢測中的選擇差異？
日期：2025-06-24 16:18:17
在ELISA試劑盒檢測中，血清樣本與血漿樣本的選擇差異主要源于兩者的成分組成、制備方法及理化性質(zhì)的不同。這些差異會(huì)直接影響檢測的準(zhǔn)確性、特異性及實(shí)驗(yàn)操作的便利性。以下從多個(gè)維度詳細(xì)解析兩者的選擇要點(diǎn)及應(yīng)用場景：
2. 干擾案例
一、樣本制備與成分差異
1. 制備流程對(duì)比
| 項(xiàng)目 | 血清樣本 | 血漿樣本 |
| 采集方式 | 靜脈采血后，室溫靜置30-60分鐘使血液凝固，再離心（3000rpm，10分鐘）獲取上清液。 | 采血時(shí)加入抗凝劑，立即顛倒混勻，離心（3000rpm，10分鐘）獲取上清液。 |
| 關(guān)鍵步驟 | 等待凝血過程，可能產(chǎn)生纖維蛋白凝塊，需過濾或二次離心。 | 抗凝劑選擇需與檢測項(xiàng)目匹配，避免抗凝劑干擾。 |
| 處理時(shí)間 | 凝固+離心約1-2小時(shí)，耗時(shí)較長。 | 抗凝后可立即離心，處理時(shí)間短（約30分鐘）。 |
2. 成分差異對(duì)檢測的影響
（1）血清：
不含纖維蛋白原，但含有凝血因子降解產(chǎn)物（如D-二聚體）、抗體、細(xì)胞因子、激素等。
優(yōu)點(diǎn)：成分更接近生理狀態(tài)，適用于檢測與凝血無關(guān)的指標(biāo)（如抗體、多數(shù)細(xì)胞因子）。
缺點(diǎn)：凝血過程中可能釋放細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)（如乳酸脫氫酶），導(dǎo)致溶血風(fēng)險(xiǎn)；纖維蛋白凝塊可能堵塞加樣針或干擾反應(yīng)。
（2）血漿：
含纖維蛋白原及抗凝劑（如肝素、EDTA、檸檬酸鈉），不含凝血因子 Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ等（因未激活凝血過程）。
優(yōu)點(diǎn)：抗凝劑可抑制凝血，適合檢測易降解的分子（如某些激素、神經(jīng)遞質(zhì)），且處理快速，適合急診檢測。
缺點(diǎn)：抗凝劑可能與檢測體系中的抗體或抗原結(jié)合，導(dǎo)致假陽性或假陰性（如肝素帶負(fù)電荷，可與帶正電荷的蛋白結(jié)合）。
二、抗凝劑對(duì) ELISA 檢測的干擾機(jī)制
1. 常見抗凝劑的影響
| 抗凝劑類型 | 作用機(jī)制 | 對(duì)ELISA的干擾 | 適用檢測項(xiàng)目 |
| 肝素 | 抑制凝血酶和因子Xa | 與帶正電荷的蛋白（如抗體、抗原）結(jié)合，導(dǎo)致非特異性吸附，增加背景信號(hào)；可能激活補(bǔ)體系統(tǒng)，干擾免疫反應(yīng)。 | 不適合檢測抗體、細(xì)胞因子；適合檢測與肝素?zé)o關(guān)的指標(biāo)（如病毒核酸）。 |
| EDTA | 螯合Ca²?，抑制凝血酶激活 | 可能螯合檢測體系中的Ca²?依賴性蛋白（如某些酶標(biāo)抗體），影響酶活性；對(duì)依賴Ca²?的抗原 - 抗體結(jié)合有抑制作用。 | 適合檢測不依賴Ca²?的指標(biāo)（如多數(shù)細(xì)胞因子、病毒抗體）。 |
| 檸檬酸鈉 | 螯合Ca²?，抑制凝血酶生成 | 對(duì)pH影響較小，但高濃度可能稀釋樣本，降低檢測靈敏度；可能與某些抗體的Fc段結(jié)合，導(dǎo)致假陽性。 | 適合檢測凝血因子、補(bǔ)體成分等；不適合檢測需中性pH環(huán)境的指標(biāo)。 |
2. 干擾案例
肝素干擾實(shí)例：在檢測IL-6時(shí)，肝素可與IL-6的受體結(jié)合，導(dǎo)致ELISA結(jié)果偏低；在檢測抗磷脂抗體時(shí)，肝素可能與抗體競爭結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致假陰性。
EDTA干擾實(shí)例：在檢測Ca²?依賴性蛋白（如組織因子）時(shí)，EDTA會(huì)螯合 Ca²?，使蛋白失活，導(dǎo)致結(jié)果偏低。
三、檢測項(xiàng)目與樣本類型的匹配原則
1. 優(yōu)先選擇血清的檢測場景
抗體檢測：如病原體抗體（HIV、HBsAb）、自身抗體（ANA、抗dsDNA抗體）等，血清中抗體濃度穩(wěn)定，且凝血過程不影響抗體活性。
細(xì)胞因子與炎癥因子：如TNF-α、IL-1β等，血清中這些因子的含量與生理狀態(tài)一致性高，且不受抗凝劑干擾。
激素檢測：如甲狀腺激素（T3、T4）、性激素等，血清中的激素結(jié)合蛋白（如甲狀腺素結(jié)合球蛋白）含量穩(wěn)定，適合定量分析。
腫瘤標(biāo)志物：如 CEA、AFP 等，血清樣本的檢測標(biāo)準(zhǔn)化程度高，臨床參考范圍更明確。
2. 優(yōu)先選擇血漿的檢測場景
易降解分子檢測：如兒茶酚胺（腎上腺素、去甲腎上腺素）、前列腺素等，血漿抗凝處理可快速終止代謝，保持分子穩(wěn)定性。
凝血相關(guān)因子：如凝血因子Ⅷ、Ⅸ，血漿未激活凝血過程，可準(zhǔn)確反映因子含量；而血清因凝血過程消耗因子，不適用。
急診或快速檢測：血漿處理時(shí)間短，適合需要立即出結(jié)果的場景（如急診感染標(biāo)志物檢測）。
特定抗凝劑匹配的檢測：如使用檸檬酸鈉抗凝的血漿適合檢測凝血因子，使用EDTA抗凝的血漿適合檢測某些酶類（如乳酸脫氫酶）。
四、樣本處理對(duì)檢測結(jié)果的影響
1. 溶血、脂血的影響差異
（1）溶血：
血清樣本：凝血過程中紅細(xì)胞破裂可能導(dǎo)致溶血，釋放血紅蛋白及細(xì)胞內(nèi)酶（如 LDH），血紅蛋白可與酶標(biāo)抗體競爭結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致假陰性；細(xì)胞內(nèi)酶可能干擾底物顯色。
血漿樣本：采血時(shí)混勻不當(dāng)或離心速度過高可能導(dǎo)致溶血，但抗凝劑可減少凝血過程中的紅細(xì)胞損傷，溶血風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較低。
（2）脂血：
兩者均可能因脂質(zhì)顆粒干擾光吸收，導(dǎo)致OD值偏高，出現(xiàn)假陽性。但血漿樣本因抗凝處理后可立即離心，若存在脂血可通過高速離心（如4000rpm）或脫脂處理（如正己烷萃取）改善，而血清樣本的脂血處理更困難。
2. 儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
短期儲(chǔ)存（<24小時(shí)）：血清和血漿均可4℃保存，但血清需注意避免反復(fù)凍融（可能導(dǎo)致蛋白變性）；血漿需注意抗凝劑是否在低溫下析出（如檸檬酸鈉可能結(jié)晶）。
長期儲(chǔ)存（>24小時(shí)）：均需-20℃或-80℃凍存，血清凍融次數(shù)建議≤3 次，血漿因抗凝劑存在，凍融后成分更穩(wěn)定（如肝素可抑制某些酶的活性）。
五、試劑盒說明書的推薦與實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
1. 試劑盒設(shè)計(jì)的樣本類型偏好
多數(shù)ELISA試劑盒推薦血清：因血清成分更接近臨床常規(guī)檢測樣本，且抗凝劑干擾的可能性低。例如，腫瘤標(biāo)志物檢測試劑盒通常明確標(biāo)注 “僅適用于血清樣本”。
特定試劑盒推薦血漿：如凝血因子檢測試劑盒、兒茶酚胺檢測試劑盒，會(huì)明確要求使用指定抗凝劑（如檸檬酸鈉）的血漿。
2. 跨樣本類型使用的驗(yàn)證要求
若需用血漿替代血清（或反之），需進(jìn)行以下驗(yàn)證：
平行性試驗(yàn)：用同一批樣本的血清和血漿分別檢測，比較結(jié)果的相關(guān)性（如 Pearson相關(guān)系數(shù)需>0.9）。
回收率試驗(yàn)：向樣本中添加已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，檢測回收率（應(yīng)在80%-120%范圍內(nèi)）。
干擾試驗(yàn)：檢測抗凝劑是否對(duì)體系產(chǎn)生干擾（如添加肝素到血清樣本中，觀察OD值變化）。
六、臨床與科研中的選擇策略
1. 臨床檢測的優(yōu)先原則
常規(guī)項(xiàng)目：如肝功能、腎功能、腫瘤標(biāo)志物，優(yōu)先選血清，因臨床參考區(qū)間基于血清建立，且醫(yī)院檢驗(yàn)科血清樣本處理流程更成熟。
急診項(xiàng)目：如降鈣素原（PCT）、C反應(yīng)蛋白（CRP），優(yōu)先選血漿，因處理時(shí)間短，可快速出結(jié)果。
凝血相關(guān)項(xiàng)目：如D-二聚體、纖維蛋白原，必須選血漿（檸檬酸鈉抗凝），血清因凝血過程消耗相關(guān)因子，結(jié)果不準(zhǔn)確。
2. 科研實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)
機(jī)制研究：若檢測目標(biāo)為細(xì)胞分泌因子（如細(xì)胞培養(yǎng)上清中的細(xì)胞因子），樣本類型需與體內(nèi)環(huán)境一致（如血清模擬體內(nèi)血液循環(huán)狀態(tài)）。
縱向研究：需保持樣本類型一致（如所有時(shí)間點(diǎn)均用血清或血漿），避免因樣本差異導(dǎo)致結(jié)果波動(dòng)。
多中心研究：需統(tǒng)一樣本類型及抗凝劑種類，減少實(shí)驗(yàn)誤差（如多中心檢測IL-6時(shí)，統(tǒng)一使用EDTA抗凝血漿）。
七、樣本選擇的決策流程
明確檢測目標(biāo)：分析檢測分子的性質(zhì)（如是否易降解、是否依賴凝血因子）。
查閱試劑盒說明：嚴(yán)格遵循試劑盒推薦的樣本類型及抗凝劑要求。
評(píng)估抗凝劑干擾：若必須使用血漿，選擇與檢測體系兼容的抗凝劑（如EDTA適用于多數(shù)蛋白檢測，肝素僅在特定情況下使用）。
優(yōu)化樣本處理：血清需避免溶血和凝塊，血漿需確保抗凝劑與血液比例正確（如檸檬酸鈉與血液比例1:9）。
實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：跨樣本類型使用時(shí)，通過平行性、回收率等試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果可靠性。
通過以上維度的綜合考量，可最大限度減少血清與血漿樣本在ELISA檢測中的選擇偏差，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。
