組織勻漿樣本如何制備才能滿足ELISA試劑盒的檢測(cè)要求？?
日期：2025-12-15 11:21:24
制備滿足ELISA檢測(cè)要求的組織勻漿樣本，核心是全程低溫操作和充分裂解組織，同時(shí)避免蛋白降解、污染和過度稀釋。
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1、試劑與耗材準(zhǔn)備
選擇合適的組織裂解液，常用RIPA裂解液，可根據(jù)需求添加蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。
準(zhǔn)備預(yù)冷的PBS緩沖液，用于清洗組織表面雜質(zhì)。
耗材包括勻漿器、離心管、移液槍頭，均需提前滅菌并預(yù)冷。
2、樣本預(yù)處理
新鮮組織取下后，立即用預(yù)冷PBS沖洗，去除血液和結(jié)締組織。
用吸水紙吸干表面液體，快速稱重，建議取50–100mg組織用于勻漿。
二、組織勻漿制備步驟
1、組織破碎與裂解
將稱重后的組織放入預(yù)冷的勻漿管，按1:9或1:10的比例加入預(yù)冷的裂解液。
冰浴條件下，使用電動(dòng)勻漿器或手動(dòng)研磨杵充分勻漿，直至無明顯組織塊。
勻漿完成后，冰上靜置裂解20–30分鐘，期間可輕輕顛倒混勻數(shù)次。
2、離心分離上清
將勻漿液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷離心管，4℃條件下12000–15000rpm離心15–20分鐘。
離心后，用移液槍小心吸取上清液，避免吸入沉淀和中間層雜質(zhì)。
3、樣本處理與保存
3、樣本處理與保存
吸取的上清液即為組織蛋白提取液，可立即用于ELISA檢測(cè)。
暫不使用的樣本需分裝后于-80℃保存，避免反復(fù)凍融，建議分裝為單次檢測(cè)用量。
三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
全程低溫：從組織取材到離心、保存，所有步驟盡量在4℃或冰上進(jìn)行，防止蛋白降解。
抑制劑添加：蛋白酶抑制劑需臨用前加入裂解液，抑制內(nèi)源性蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的水解。
避免污染：操作過程中嚴(yán)格無菌，防止雜蛋白或酶類污染，影響ELISA結(jié)果。
濃度適配：勻漿比例需根據(jù)組織類型調(diào)整，若目標(biāo)蛋白含量低，可適當(dāng)提高組織與裂解液比例。
